闭关

。。。

眨眼间居然已经四个月了。。。四个月。。。。

老板让写进度汇报。。。。。。。。。可是我都做了些什么呢。。。。。

Culture Cell, Primer Design, Plasmid Design and Construction, SiRNA Design, SiRNA Construction, Transformation, Plasmid Purification, Transfection(Lipo & Electroporation), FRET, Single Living Cell Analysis.........外加半调子 Confocal Microscope...

其中有几个还是当年就会的-_- 真是郁闷啊啊。。

除了那些以外，好像已经完成得就只有两个Plasmid的Construction－－YPF-Mad2 & CFP-Mad2。。外加四个SiRNA的Construction－－ Mad1-SiRNA, Mad2-SiRNA, Bub3-SiRNA和BubR1-SiRNA了。。。

至于未来展望。。。。

1，Finish the SiRNA construction of these mitotic proteins -- Mad1, Rod, Zwilch, Zw10

2，Using Single living cell analysis and FRET to check the interaction between Mad1(YFP) and Mad2(CFP) during Mitotsis -- When combining and when separating. (In Ptk2 Cell system-- firstly should solve the synchronizing problem)

3，Using single living cell analysis and FRET to check the localization of MCC (Mitotic Checkpoint Complex) during mitosis and the interaction between its members -- Mad2, Bub3, BubR1 and Cdc20 －－When to form and when to separate?

4，Test the functional roles of Mitotic Spindle Checkpoint proteins such as Bub3, BubR1, Mad2, and Mad1 by SiRNA silencing.

5，Trying to test the exact localization of APC (Anaphase promoting complex) during mitosis (especially during prometaphase and metaphase), using Single living cell analysis. And comparing it with the localization of Mad2. Then according to the result, if they apart far away from each other, to see whether can analysis the linking mechanism between APC and Mad2,  since the second one inhibits the first one directly.

6，To see when the three-RZZ-protein formation happens during cell cycle, then try to test the changing of the localization of RZZ complex and study its interaction with Mad1-Mad2 complex during mitosis (Especially prophase, prometaphase and metaphase), using single living cell analysis and FRET. And study the functional roles of the characters of RZZ complex, by silencing certain proteins.

 

- - 草稿草稿。。。其实好多都是异想天开的试验设计，一点责任都不负的那种。。。Ptk2 cell的synchronization还没解决，confocal那边CFP的exitation还没装上，Bub3、BubR1和Bub1的gene还没要到。。。RZZ的更不知道从何要起。。而且RZZ太新，所以连Antibody都买不到orz。。。。还是打听打听自己做Antibody的方法吧。。。貌似中科院遗传研究所可以？？

另外因为有关FRET的部分，都是要使用PtK2 cell，所以首要问题当然是解决Synchronization，如果不行的话，就必须换一个system了。。orz 不过不知道那些FRET能不能用分别转入不同的protein然后做localization的comparation来完成？明天问问大师姐。。。不过貌似那个很难证明是combination，撑死了说明位置一样而已。。

好难做啊啊啊啊啊！！！那些complex，一下转入那么多的Plasmid然后都表达出protein然后做FRET简直就是不可能完成的任务……就算每次转入Plasmid的几率是50％，那么两个protein一起转入的几率就只有25％，而Mitotic cell本身占所有cell的总数就不到10％，Porphase和Prometaphase的cell更少。。。也就是说几百个cell里面能找到一个就不错。。。这样几率太小了，试验的效率太低。。。Microinjection。。觉得那个能解决很多问题啊。。。-_-虽然准备学了，不过貌似也很难

至于三个protein甚至四个protein的interaction，也就是说compex的formation怎么检测。。。。貌似FRET不可能一下用三个fluorescent protein吧。。难道真的要两两的做？orz。。。忽然觉得自己真是无知。。。明天去好好研究研究-_-

 

总之。。。到这里四个月我到底都干了些什么啊……郁闷啊……为了舒缓郁闷。。。周六逛街去-_-

 

2005年的最后一天，在几乎前所未有的忙碌中度过。。

实在是觉得很爽，所以一定要记下来。。。

 

由于对自己以前的那个小房间忍无可忍，于是决定换个大房。

早上ZD Check out，于是和ZH一起去SHO登记换房。没想到过程蛮顺利。。。回来之后大概收拾了一下东西，就去实验室了。吃过午饭回来，开始正式搬家。开始WR很nice地帮了一会儿，之后便一直自己奋斗……才发现自己的东西怎么这么多|||||||||||||||||||||||||

虽然只是从公寓的一个房间搬到另外一个房间，不过连清扫带折腾加上搬抽屉扛箱子的，也俨然进行了将近七个小时才搞定。。。之后杀去超市买挂钩和胶带（以前房间的都摘不下来。。要重新搞定），然后把衣服送去洗，同时接到大师姐电话，8点钟要换Memdium。。。

于是很郁闷地在室友preparing新年火锅的时候跑到实验室，回来的路上衣服正好烘干完毕，于是抱了一堆上来，发现自己的胳膊都在抖。。。体力劳动过度了么？还真是缺练啊。。

回来的时候室友已经快吃完了。不过她们买的东西足够再塞饱本人的。。从中午一点到晚上九点，终于可以坐下来休息休息了。。。

火锅享受完毕，因为没有参与准备。。所以英勇地承担了最痛恨的刷碗的任务。。。- - 一边刷碗一边吼叫：你们谁都不许用浴室！！

。。。

鬼知道今天香港怎么这么热。。。做为一个从中午2点就盼着能洗澡的人。。。个人认为那种蛮横也是很可以理解的。。。-__-

 

很爽地洗完了澡。终于打开电脑，坐在桌子前面上网

其实已经非常非常累了，但是由于种种原因、加上一定的心理障碍，所以还是promise把某张贺图的底色。。。反正已经做了这么多事情了，再多一件也无所谓。

11点45，在室友的感慨中杀去实验室Release。。。临走抄上了saga的模型。。不管怎么说也得有个家伙陪我数秒么，嗯嗯

搞定试验已经12点半多了。回到宿舍开始继续画图一直到将近四点。。。

 

虽然现在的感觉基本上是不沾床都会睡着了。。。但是发现忙死人的日子真的不错。。尤其是当累到大脑短路只能进行极其有限的思维活动的时候。忽然觉得其实这郁闷那痛苦都是人在吃到撑之后实在没事干只好以自虐来消遣热量和时间时的产物。。。真是无聊啊－ －

工具的生活，其实才是简单而快乐的生活。。也是很有成就感的生活。。于是许愿，希望我的2006天天如此。

嗯嗯

 

一直到现在才有时间写blog。。。。坐在我宽敞的房间里的宽敞的桌子前，祝各位新年愉快万事如意身体健康吃嘛嘛香天天忙死累死幸福死（理论见上）。

 

--- by 以工作狂人为目标而努力的某人