1，endless experiment，from dawn until dark

2，Cell Cycle Control presentation & examination

3，paper reading

4，《Molecular biology of the cell》 reading

5，English Improvement

 

6，Earning money from BJD clothes

7，SummeryFancy

 

Well，busy days，嗯嗯

 

据说忙到死还能把所有时间都安排好把所有事情都解决好并且照顾好自己的身体，也是一种本事

狞笑。。。还能难得倒天才我么

自从昨天（貌似已经是前天了。。）凌晨开始就一直出于兴奋状态。。

五次repeat，不停改protocal，Good Friday每天test到半夜，终于有了结果。

听说repeat别人的试验非常困难，尤其是日本人的。但是居然可以看到结果，老天真的待我不薄= =

凌晨四个多小时的等待做成Movie，只有短短的20秒。

看起来很爽

想起professor曾经说过，对别人的研究成果感兴趣，未必是真正适合做scientist的人。当你真正面对science的时候，就会发现所有的结果，都只是结果而已；而过程，是超乎想象的艰难。

 

一度觉得自己不是适合science的人，但是仔细想想，却发现其实自己骨子里还是有一种渴望，不管经历过什么，从来没有湮灭。所以每次参加各种seminar的时候，看到台上台下或年老或年轻的人们，没有西服革履没有穿金戴银也从来不见觥筹交错，投影屏上的曲线也不是企业赢利或者国民生产总值上升幅度而只是过了多久cell死掉多少的简单统计，但是就是觉得这样一群人们，很耀眼。

毕竟，那是只凭借金钱和权势，永远也得不到的智慧。

 

其实现在科学界，早就充斥着财富和功利，更有人捏造数据，只为了所谓的影响因子。且不说别人，也许我自己也永远到达不了那个境界－－无谓世俗纷争，忽略金钱名利，只是像个孩子一样沉迷于自然的魅力；但是我会永远敬佩到达了那样境界的scientist，因为就算是他得不到任何来自周围的肯定，就算他最终因此会失去一切，但至少他有权力拥有来自Mother Nature的奖励－－简单的幸福、精神的年轻、永恒的童心和好奇心被满足之后的无上快乐－－

 

这是一个人一生中能得到的，最珍贵的赏赐

我一直坚信

 

 

 

 

換暸MEM

老子終于看到cytokinesis暸啊啊啊啊啊啊啊啊阿！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！

 

（淚流滿麵）

 

 

不管是不是without chromosome separation的

 

他媽的明天繼續！！！

tmd又没做出来－ －

 

Lipo test了1.5ul, 1ul, 0.5ul，夜里2点换mem（6hr），明天上午12点之前看结果。然后决定要不要做second lipo。

 

 

至于那个repeat的试验。。。1点加nocodazole，7点就发现很多cell mitosis了……果然是因为thymidine以后cell先要repair，然后加上从G1/S到G2/M的时间（查各个phase准确时间），因此只是提高了同步效率，但是延长了noco treat到Mphase 的时间。

 

但是release（MEM，3times，3min/time）了以后，15分钟加PA，却发现cell都arrest在mitosis。。两小时orz

真是服了。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。－ －

难道是

1，noco没release干净？

2，mem的PH不对？

 

明天和professor谈谈，继续repeat。

 

还要做protein lysate和Plasmid Purification。。

－ －

 

 

忽然发现对我来说，BLOG存在的最大意义了。。

Experiment discussion的良好记录板，嗯嗯

 

今天count了lipofectamine testing的cell，发现1.00ul的居然也只有25％的transfection efficiency……开始目测以后还告诉Professor说是78到80％…………真是惭愧致死啊，看来我的目测水平还真是。。夸大事实＝ ＝ 看来以后估计之后报数要降点儿。

0.25和0.5ul的就更不用说了，还不到20％。double0.5ul以后的也同样很低，0.5+0.5的efficiency和1.00ul的差不多，还要更久的时间。

另外professor说cell太密。。以后看来种个35％就差不多了。

 

另外一个试验实在是超郁闷

按照文献上说，double thymidine之后release到nocodazole里6到10小时，然后加Purvalanol A抑制CDK1，cell在15分钟内就可以观测到cytokinesis。。。

我在repeat的过程中遇到的问题如下：

（吃了盒方便面。。。大脑缺氧状态得到缓解－ － 继续继续）

 

1，Double Thymidine之后的cell，Nocodazole synchronization到mitosis，大概要八到十个小时，效率才比较高。尤其是超过九小时的时候，60％以上的cell都在mitosis。但是因为我要release在nocodazole里让cell贴壁，而treat太久cell是要apoptosis的，所以八小时的time point比较合适，而这个时候60mm dish里的cell是不够多的，所以我决定下次试试90mm的dish。

 

2，cell贴壁还是困难。总结原因应该是如下：

（1） Double thymidine之后的cell比较老（22＋24＝46hr），导致不够fresh，贴壁比较困难

（2）nocodazole 的时候，mitotic cell不够多，于是treat了九个多小时，导致cell结构破坏比较大

（3）cell都是mitotic的round型，所以贴壁本身就比普通cell慢。加上以上两点导致cell饱经风雨，所以更迟钝。

事实是，普通的cell一小时就可以多多少少贴一些在壁上，但是我这次的试验，一个半小时了cell不光没有贴壁，反而以前贴的也掉下来不少。当然这个要归结于nocodazole的时间太久，是我第一次进行试验所以经验太少。以后一定要用大dish多弄一些mitotic cell。

 

3，最后观测中，cell居然arrest在mitosis。不过这个可能是因为nocodazole处理的时间太久了。。－ －

 

 

明天和老板discuss，应该是要说以下两个问题

 

1，lipo testing方面，现在的效率肯定不行，我想重新尝试一下YFP－C1，三个浓度取1.5ul、1ul、0.5ul。然后看情况决定second lipo做那几个。

 

2，repeat 文献experiment方面，除了上面那个贴壁问题，其实我觉得他们在做single living cell的时候，根本就没有用shake off的方法，而是直接release然后观测的。反正又不用太多cell，有一些background也没什么。需要指出的是，9小时到十小时左右的noco treat，已经80％左右的cell在mitosis了，就算是有interphase的cell，也非常少。这个情况我觉得已经可以直接release然后试验了，小心一些应该不会loss太多cell。当然，这个80％也许是因为Thymidine之前treat过 (TEST1)，所以cell同步率比较高，这个以后可以做一个试验试试看，或者下次就可以尝试一下。另外我发现mitosis cell很难摇下来啊……是不是double thymidine让cell长得太牢固了？还是因为摇的时候需要用PBS (TEST2) ？总之我认为小心一些，直接release应该是没有问题的。

 

综上，我想改变对方的protocal，因为实在是费力不讨好。。。很想试试不用thymidine，直接用holed dish来culture cell，然后在dish里有60％到70％的cell的时候，用nocodazole synchronize，接着9到10小时以后小心release到fresh memdium里，然后15min加PA。

不知道这样能不能work。这个的好处就是做一次很快。我觉得就算是要重复double thymidine的试验，也可以同时尝试一下这种。

而如果一定要重复shake off，我会用90mm的dish来collect cell。这样noco的时间稍微短一点，觉得cell会贴壁比较快。

 

 

anyway，明天的work是

 

1，Plasmid purification（6×）

2，Protein Lysate

3，Lipo testing repeat（3 dishes, morning, after discussion）

4，Nocodazole synchronization testing (at noon)

     Release & PA adding (evening, around 9 to 10 pm)

     Photos (10pm to 1am) 

    firstly, to see whether the efficiency is the same --70% to 80% after 9 to 10 hours -- if    without double thymidine treatment.

    Secondly, test carfully & enhanced releasing(using MEM!!) & PA induced precocious cytokinesis.

   

 

anyway,终于可以回宿舍睡觉了－ － 九点还要起床。。预感到又要被professor教育了－ －

明天下午要去旺角。。真不想去。

好几天没看新paper了－ － 惭愧

 

 

如果试验成功，本人会请你吃饭的

communication果然重要……

 

忽然在想cell之间是不是也是如此 - -

orz

 

我心爱的cytokinesis，我来了。

 

今天（昨天？）被professor批评||||||||

说应该focus在一个问题上，不要一个没完就想其他的

但是真的很难控制= =

果然花心是我的本质么orz

 

 

另外，只不过是晚上吃饭稍微晚了点儿。。。也就十点多吃的啊

怎么居然四点的时候被胃酸反醒

FT，果然我消化道已经进入老年期了么

 

见鬼了

 

 

继续睡觉。。早上八点之前还要起来干活orz

昨天给家里打电话

发现我这几年过得真tmd是混蛋日子

 

混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋混蛋

 

 

爽了，干活去

从今天开始本人姓Biology

harvard，等着我吧

 

PS：还是发现汉字重复地看多了就不认识是什么玩意了，和人一样

想洗澡居然浴室被美女占领

= =#

趁着这个时间写点什么吧。

 

最近心情一直不稳定，不过希望这是回归稳定的前兆。

 

昨天是4月5日，清明节。

其实如果不是家人提醒，自己完全忘了还存在清明节这么个东西……就算是被提醒了，结果还是不断忘掉“今天是清明节”，就好像在自己的生日那天一样。然后等到忽然想起来，发现已经过了12点。

我是不是老年痴呆了？= =

 

也许现在对我来说，没有什么事情是需要特别记忆，也没有什么事情是需要刻意忘记吧。

一切顺其自然，该想起来的，总会想起来；无所谓的东西，也会自然忽略。

但是有一些想忘记的，为什么永远不会被彻底忘记？不管多么专注于其他，也常常会莫名其妙地随时浮现出来，干扰心情？

大概是因为自己其实根本不想忘，还是因为它已经融入我的灵魂和染色体，注定要随着我的死亡，被带入泥土？

烦人的感觉，不过随它去吧。

 

不过仔细想想，事实也许就是如此。

越是专注于眼前，越容易淡漠陈旧的东西；猛然醒悟时，回头看，发现已经错过。

然后笑笑，说人生不过如此。

完全不必担心，因为不管如何在意现在，冥冥中已然注定的一些，也会永远伴随自己。

 

 

GOD和蔼地微笑着说，抵抗无效

所以放弃抵抗

于是，得以继续前行，向着目标，或者没有目标

 

 

PS：发现自己依旧看不到自己blog的文字。。。估计是老天注定这些东西，对我来说只是梦呓而已

 

 

 

 

晚安了各位

 

嗯嗯

 

Ps：我为什么看不到自己blog的文字？难道都lost了？

orz